Akademik Veri Yönetim Sistemi
Boron22, İstanbul, Türkiye, 5 - 07 Ekim 2022, cilt.1, sa.1, ss.386-387
GİRİŞ
Transkripsiyon faktörü olan NF-κB (nükleer faktör kappa B) proteini, hücrenin enflamatuar ve
immün tepkileri, hücre büyümesi ve gelişimi gibi bir dizi işlemde yer alan çok çeşitli genlerin
ekspresyonunu düzenler (1). En zengin kaynakları Türkiye’de bulunan bor mineralinin, insan
sağlığı üzerine birçok metabolik ve biyokimyasal etkisi olduğu bilinmektedir (2). Bu çalışma
kapsamında HEK293 hücreleri model olarak kullanılarak borik asitin NF-κB yolağını regüle
edebilme kapasitesi araştırılmak istenmektedir. Kullanılan hücre hattında NF-κB transkripsiyon
faktörünün bağlanacağı bir promötor bölgesi kontrolünde bulunan yeşil floresan protein (GFP)
ifadelenme kaseti genoma entegre edilmiş şekilde bulunmaktadır. Bu modelde NF-κB’yi aktive
eden herhangi bir uygulama hücrelerin içerisinde yeşil floresan proteinin oluşumuna neden olur
ve bu durumda floresan deteksiyonu akış sitometre sayesinde tespit edilebilir. Bu çalışmada
TNFα ile aktive edilen hücrelerde borik asit muamelesinin NF-κB GFP ifadelenmesine etkisi
araştırıldı.
METOTLAR
Bu araştırmada NF-κB-GFP belirteç sistemi entegre edilmiş transgenik HEK293 hücreleri model
olarak kullanılmıştır. Bu doğrultuda, çalışma için uygun TNFα ve borik asit miktarları tespit
edilerek TNFα ile uyarılmış ve aktifleşmiş NF-κB sinyal iletim yolağına, kontrol grubuna kıyasla
borik asitin etkisi incelenmiştir. Borik asitin NF-κB yolağını regüle edebilme kapasitesi akış
sitometrik analizlerle belirlenmiştir. TNFα ve borik asit uygulanmış hücrelerin GFP
yoğunluğunun ortalaması, üç bağımsız biyolojik deneyden hesaplanmıştır.
BULGULAR VE TARTIŞMA
12 saatlik uygulamalardan sonra, akış sitometresi ile toplamda 10.000 hücre analiz edilmiştir.
Tablo 1. HEK293 hücrelerinde, 10 ng/ml TNFα + Borik asit uygulaması
sonrası GFP Yoğunluk Ortalaması ve Kat Yoğunluk Değerleri
Gruplar GFP Yoğunluk
Ortalaması
Kat
Yoğunluğu
Kontrol grubu 3110 1
10 ng/ml TNFα 22128 7.11
10 ng/ml TNFα + 10 μM Borik asit 17388 5.59
10 ng/ml TNFα + 25 μM Borik asit 16256 5.22
10 ng/ml TNFα + 50 μM Borik asit 16415 5.27
10 ng/ml TNFα + 75 μM Borik asit 13435 4.31
10 ng/ml TNFα + 100 μM Borik asit 14735 4.73
387
10 ng/ml TNFα + 125 μM Borik asit 16323 5.24
10 ng/ml TNFα + 150 μM Borik asit 15200 4.88
10 ng/ml TNFα + 175 μM Borik asit 13465 4.32
10 ng/ml TNFα + 200 μM Borik asit 14184 4.56
10 ng/ml TNFα + 225 μM Borik asit 12216 3.92
Bu çalışmada kullanılan HEK293 hücrelerine belirli dozlarda TNFα verildiğinde, hücrelerde
kontrol grubuna kıyasla 6-8 kat daha yoğun GFP ekspresyonu belirlenirken sadece borik asit
uygulandığında, hücrelerde kontrol grubuna kıyasla eşit veya daha az yoğunlukta GFP
ekspresyonu gözlemlenmiştir. TNFα ve farklı dozlarda borik asit birlikte verildiğinde ise, TNFα
grubuna kıyasla GFP yoğunluğunun azaldığı gözlemlenmiştir.
Şekil 1. Borik asit, TNFα, ve TNFα + borik asit uygulamalarının GFP yoğunluk grafiği
VARILAN SONUÇLAR
Analizler sonucunda, HEK293 hücrelerine tek başına borik asitin muamelesi kontrole kıyasla
etkili bir fark oluşturmamışken, TNFα ile aktive edilen yolakta borik asit muamelesinin NF-κB
aktivasyonunu azaltıcı yönde etkisi olduğu ortaya konmuştur.
TEŞEKKÜR
Bu çalışma İnönü Üniversitesi BAP birimi tarafından TYL-2021-2387 nolu proje ile
desteklenmiştir. HEK293 NFkB-GFP hücre hattını bizimle paylaştığı için Prof. Dr. Batu Erman’a
teşekkür ederiz.